細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的日常，都是跟細(xì)胞培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇這些基本的操作密不可分的。在細(xì)胞凍存和復(fù)蘇領(lǐng)域一直奉行著一條黃金法則，那就是“慢凍快融”！ 實(shí)驗(yàn)證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。
慢凍
細(xì)胞是很脆弱的，尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，只有一層薄薄的細(xì)胞膜，沒(méi)有堅(jiān)固的細(xì)胞壁保護(hù)，在進(jìn)入凍存狀態(tài)前，緩慢的降溫過(guò)程有助于保存細(xì)胞的活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。
快融
細(xì)胞復(fù)蘇，是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)的過(guò)程。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成的損傷。
最常見(jiàn)的復(fù)蘇工具
水作為一種使用廣泛的導(dǎo)熱介質(zhì)，具有良好的導(dǎo)熱性，可以保證快速加熱，同時(shí)也可防止凍存管內(nèi)部的局部過(guò)熱。水浴是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)配置之一，在進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)時(shí)，無(wú)需額外的輔助設(shè)備或試劑。然，水浴經(jīng)常是作為實(shí)驗(yàn)室共享的設(shè)備，若無(wú)專人值守，則水浴槽內(nèi)的水不會(huì)定期進(jìn)行更換，就會(huì)攜帶污染，會(huì)間接導(dǎo)致復(fù)蘇細(xì)胞的污染風(fēng)險(xiǎn)。復(fù)蘇過(guò)程，常伴隨著對(duì)凍存管的晃動(dòng)（晃動(dòng)可以防止管內(nèi)樣品產(chǎn)生溫度差異），管蓋處也有滲入水的可能。
Matrix 恒溫混勻儀
Matrix Orbital Delta Plus高低溫混勻儀，搭配Cryo attachment（24 位凍存管配件，兼容1.5-2.0ml凍存管），可同時(shí)對(duì)多達(dá)24個(gè)凍存管進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇操作，適用于多種細(xì)胞類型，且具有與傳統(tǒng)方法（如水?。┑韧膹?fù)蘇效率。儀器自帶編程功能，用戶可進(jìn)行個(gè)性化編輯，預(yù)存儲(chǔ)特定細(xì)胞的復(fù)蘇溫度、混勻速度、反應(yīng)時(shí)間等參數(shù)，利于不同細(xì)胞處理時(shí)的程序調(diào)用，方便快速。
為防止冷凝，確保體系內(nèi)的試劑樣本無(wú)損失，高溫反應(yīng)時(shí)還可以選配熱蓋：
具備模塊自檢功能，根據(jù)模塊自動(dòng)限定最大運(yùn)行速度，多達(dá)13 種模塊可按需選配。
溫度范圍：RT-15°C 至 100°C
轉(zhuǎn)速范圍：0 / 300（可調(diào)節(jié)最小轉(zhuǎn)速） – 3,000 rpm（由模塊決定）
程序控溫：包括Ramp模式，即斜率控溫,允許自動(dòng)執(zhí)行混合、加熱和冷卻任務(wù)
加熱速率：6°C/分鐘
冷卻速率: 2.5°C/分鐘
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